Methoden für eine Hefe- Drei Hybrid- System

Replikation von Chromosomen , Boten-RNA Bearbeitung, Übersetzung von Proteinen und kritische Entscheidungen in frühen Phasen der Entwicklung ist das Zusammenspiel von DNA, RNA und Proteinen. Diese Wechselwirkungen sind die grundlegenden biologischen Prozesse der Genexpression und Proteinsynthese. Wissenschaftler nutzen oft Saccharomyces cerevisiae, die gleichen Arten von Hefe beim Backen und Brauen verwendet , um die Gene, die für bestimmte Proteine ​​zu untersuchen und zu analysieren, die Wechselwirkungen zwischen Proteinen und anderen Molekülen . Die Hefe -Drei-Hybrid -System ist einer der drei Varianten des Hefe-Zwei -Hybrid-System verwendet, um diese Wechselwirkungen zu untersuchen. Das Zwei - Hybrid-System

Der Zwei-Hybrid- Verfahren verwendet wird, um Protein-Protein- Wechselwirkungen, die durch auf der Suche nach der Expression eines Reportergens zu detektieren. Viele Proteine ​​mindestens zwei Domänen oder diskrete strukturelle und funktionelle Einheiten . GAL4 , ein Protein in Saccharomyces cerevisiae , eine DNA -Bindungsdomäne ( DBD) und eine Aktivierungsdomäne (AD). Bei diesem Verfahren wird ein Hybridproteinder DBD fusioniert ist und eine zweite an den AD . Kein Reporter -Gens wird durch die Fusion von nur einer der Hybride ausgedrückt. Da die GAL4 Reporter-Gen wird nur ausgedrückt , wenn beide Hybriden vorhanden sind, wird das Protein -Protein-Wechselwirkung bezeichnet.
Die Drei - Hybrid-System

Die Drei-Hybrid- Verfahren identifiziert ein Reportergen, das die Wechselwirkung von Protein mit RNA zu detektieren. Das erste Hybridprotein besteht aus einer DBD direkt an eine RNA -Bindungsdomäne fusioniert. Die zweite besteht aus dem AD des GAL4 -Transkriptionsfaktors an eine RNA -Bindungsprotein gebunden . Die RNA- Bindungsdomänen interagieren mit einem Hybrid- RNA-Molekül , das die zwei Hybridproteine ​​bindet , um einen Komplex zu bilden. Bildung des Komplexes auslöst, die die Expression der GAL4- Reportergens. Da das Reporter-Gen wird nur auf die Bildung der Drei-Hybrid- Komplex gedreht , seine Präsenz zeigt das Zusammenspiel von RNA und Protein.
Die One- Hybrid System

ein hybrides Verfahren verwendet wird, um die Wechselwirkung des Proteins mit der DNA zu erkennen. Ein One- Hybrid-System verbindet ein einzelnes Protein , das die AD verbindet direkt mit der DBD . Anstelle der Identifizierung eines Reportergens , sieht dieses Verfahren für ein bestimmtes Protein, das eine Zielsequenz von DNA erkennen muss . Die Anwesenheit des spezifischen Proteins zeigt die Interaktion des Proteins mit DNA.
Die One-Two Hybrid System

Die Ein- Zwei-Hybrid- Verfahren wird verwendet, um Protein - Studium Protein-und Protein -DNA-Wechselwirkungen gleichzeitig . Verwendung von neu entwickelten Hefestämme verwendet dieses Verfahren die GAL4- Reportergens zu Protein -Protein-Wechselwirkungen und eine p53- Konsensus zu Protein-DNA- Interaktion zu identifizieren identifizieren. Die Methode wird erwartet, dass die Genauigkeit der experimentellen Ergebnisse deutlich zu erhöhen , indem das Auftreten von in anderen Hybridsystemen erhalten Fehlalarme.